文章插图
还原糖是指能还原斐林(Fehling )试剂、托伦(Tollen)试剂,并能与苯肼反应生成糖脎的糖 。还原糖的分子结构中一般有游离的醛基或酮基 。醛基容易被各种强或弱的氧化剂氧化成羧基,因此有游离醛基的醛糖,都具有还原性,是还原糖,如葡萄糖、半乳糖等 。许多酮糖也是还原糖,因为它在碱性溶液中可以异构化为醛糖 。斐林试剂和班氏(Benedict)试剂都是常用的检测还原糖的试剂,它们与还原糖发生反应会产生砖红色的沉淀,临床上常用于检测糖尿病患者尿液中的葡萄糖 。相应地,不能还原斐林试剂或托伦试剂的糖是非还原糖 。二糖中的蔗糖是非还原糖,多糖如淀粉、纤维素等属于非还原糖 。多糖通过水解可以生成还原性的单糖 。单糖的半缩醛羟基能与另一化合物或基团发生缩合形成糖苷 。糖苷是缩醛,一般不显示醛的性质 。
斐林试剂是德国化学家赫尔曼? 冯 ?斐林在1849年发明的 。常用于鉴定可溶性还原糖的存在 。斐林试剂与可溶性还原性糖(即醛糖)反应生成砖红色沉淀 。斐林试剂的成分为:甲液:0.1g/mL NaOH溶液,乙液为0. 05 g/mLCuSO4溶液,斐林试剂使用时要先混合再使用,其机理是碱性溶液中Cu2+是一种弱氧化剂,而可溶性还原糖中的醛基具有很好的还原性(果糖中的酮基在碱性溶液中能异构化为醛糖),两者混合后发生很慢的氧化还原反应,使醛糖的醛基氧化成羧基,产物称醛糖酸,Cu2+离子自身被还原,生成CuOH,CuOH不稳定,分解为H20和砖红色的Cu2O沉淀 。
斐林试剂必须现配现用的原因是NaOH溶液与CuSO4溶液混合会产生
Cu(OH)2而使Cu2+沉 淀,影响实验的正常使用 。在斐林试剂中常添加酒石酸钾钠作为螯合剂,与Cu2+络合以防止Cu2+沉 淀,所以高中生物学教材中强调要使用现配的斐林试剂,而且NaOH要过量 。还原糖与斐林试剂反应很慢,需要加热,为防止试管中过量的NaOH溶液沸腾溅出,造成意外伤害,故50 -65℃水浴加热,溶液的颜色由蓝色最终变成砖红色 。
综上所述,斐林试剂使用的原理是利用Cu2+ 在碱性条件下具有弱的氧化性,与可溶性还原糖反应,生成砖红色的氧化亚铜 。值得注意的是,斐林试剂本身并非无色(而是蓝色的),必须现配现用,先混合再使用,且需50 -65℃水浴加热 。
双缩脲(NH2 -CO - NH - CO - NH2)是两分子尿素加热至180℃左右,放出一个分子NH3得到的产物 。其反应式如图1所示 。
双缩脲在碱性溶液中与Cu2+反应生成复杂的紫红色络合物,此反应称作双缩脲反应 。
二肽以上的肽链中含有多个与双缩脲结构相似的肽键,因此也有双缩脲反应 。通常用质量分数为0.1g/mLNaOH溶液(A液)和质量分数为0.01g/mL的CuSO4溶液(B液)来鉴定双缩脲,故把这两种溶液称为双缩脲试剂 。双缩脲试剂与多肽反应的机理是:多肽在碱性溶液中与Cu2+反应,生成复杂的紫红色络合物 。使用时,双缩脲试剂A液1 mL,双缩服试剂 B液4滴,顺序变化对实验结果没有影响,注意B液不能多加,因其本身显蓝色,过量后会有颜色干扰 。
综上所述,“双缩脲”与“双缩脲试剂”不是一种物质,学生在答题时不能将两者混淆不清 。双缩脲试剂使用的机理是在碱性溶液的环境下,Cu2+与多肽生成复杂的紫红色络合物,B液使用量的控制是关键, 不能多加,也不用加热 。用双缩脲试剂能鉴定含有两个肽键以上的多肽或蛋白质,与二肽没有双缩脲应 。
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